多标记免疫组化染色存在诸多困难,例如抗体种属交叉反应、多轮处理后的标签稳定性、高低信号之间的平衡以及弱表达标记物的检测等。因而在 FFPE 组织或冷冻切片中检测三个或更多生物标记物成为限制研究者的一大障碍。 OpaI 是利用TSA技术开发的多标记复染方案,利用了TSA信号不受微波影响,并能在抗体去除后保留信号的原理。可以为组织样品特别是FFPE(福尔马林固定石蜡包埋) 样品进行染色,并且允许在同一样本中使用同一种属来源的不同一抗进行多标记识别。配合Vectra多光谱成像分析系统,可以获得高信噪比(扣除背景自发荧光)的图像和进行精准的批量定量分析。 以顺次染色的方式,将各色标记的酪胺共价结合到目标蛋白上,随后通过微波加热去除上一轮的抗体,清除上一轮抗体后即可使用新的抗体继续染色,且无需担心交叉反应。
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