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图 .ProQuantum 免疫检测示意图。（A）与靶标结合的抗体引物（1 小时孵育）（B）信号连接与扩增（在 qPCR 仪器中）

使用一对配对的靶标特异性抗体，每个抗体与引物偶联。该平台结合了 Applied Biosystems TaqMan 实时荧光定量 PCR 技术的灵敏度和较宽的动态范围。在抗体与分析物结合过程中，两个 DNA 寡核苷酸紧密靠近，允许两条链连接，随后产生用于扩增的模板链。每个试剂盒中提供两种抗体偶联物：3’端引物和5’端引物，各别与两个靶标特异性抗体偶联。当抗体对与蛋白质的两个不同表位结合时，3’和5’引物会彼此接近。只有当抗体对与蛋白结合时(A), 对应的2端引物才能与互补的夹板引物结合，并随后通过DNA连接酶彼此连接 (B) 引物连接后，通过95°C热灭活使连接酶、抗体和其他蛋白质变性，仅留下100个碱基的链接引物，其浓度与第一阶段抗体-蛋白结合的水平相应。将该链接引物使用TaqMan检测试剂盒进行40个qPCR循环的扩增信号。

左图：Invitrogen ProQuantum 高灵敏度人 IFNγ、IL-1β、IL-8 和 IL-6 免疫检测试剂盒（红色）标准曲线表明，其具有更宽的动态线性范围，曲线低浓度数据分辨率更明确；相比普通和超灵敏 ELISA，具有更高的灵敏度（蓝色 ）

• 高灵敏度—相比传统方法，以更高的灵敏度检测低水平蛋白。

• 动态线性范围广—≥5 对数单位，尽可能减少了样品稀释步骤，确保样品浓度在该范围内

• 样品消耗量小—样品使用量为 2-5 μL

• 工作流程快速、简单—从样品到获取结果的时间通常为 2 小时，无需清洗步骤，只需 1 小时即可孵育完成

• 无需购买专用仪器—可使用任意实时荧光定量 PCR 仪器运行

• 直观的云分析软件—全面进行数据分析和统计分组对比

检测运行可在2小时内完成。首先进行孵育步骤，使抗体与靶标分析物结合，孵育时间1小时。第二步是添加qPCR反应预混液，并将检测板放入qPCR仪器进行连接酶反应及qPCR扩增读板。